第1章 桑树生物工程 1
1.1 桑树组织培养技术 1
1.1.1 培养基 1
1.1.2 组织培养技术 3
1.1.3 桑树组织培养实例 6
1.2 桑树原生质体培养 9
1.2.1 原生质体的分离 9
1.2.2 原生质体的培养 12
1.2.3 桑树体细胞杂交 12
1.2.4 桑树原生质体培养实例 13
1.3 桑树基因工程 14
1.3.1 植物基因工程研究概况 14
1.3.2 桑树基因的克隆与功能研究 14
1.3.3 桑树转基因技术的进展 19
1.3.4 桑树基因工程的研究进展 23
1.4 桑树DNA分子标记 26
1.4.1 桑树RAPD分子标记技术的研究 26
1.4.2 桑树AFLP分子标记技术的研究 28
1.4.3 桑树SSR及ISSR分子标记技术的研究 29
1.4.4 桑树SRAP分子标记技术的研究 31
1.4.5 桑树核糖体基因内部转录间隔区(ITS)的研究 32
1.4.6 桑树trnL基因内含子及trnL-F基因间隔区序列的研究 32
参考文献 33
第2章 家蚕转基因技术与应用探索 39
2.1 家蚕转基因研究主要历程 40
2.1.1 转基因早期探索 40
2.1.2 转基因体系建立 40
2.1.3 转基因体系发展 41
2.2 外源基因导入家蚕的方法 42
2.2.1 显微注射法 42
2.2.2 扎卵法 44
2.2.3 脉冲场电泳法 44
2.2.4 压力渗透法 44
2.2.5 电穿孔法 44
2.2.6 基因枪喷射导入法 45
2.2.7 精子介导基因转移法 45
2.2.8 重组病毒介导法 46
2.2.9 性腺注射 47
2.3 家蚕转基因的载体 47
2.3.1 基于piggyBac转座子的转基因载体 47
2.3.2 基于minos转座子的转基因载体 55
2.3.3 基于mariner转座子的转基因载体 55
2.3.4 基因打靶载体 56
2.3.5 其他类型载体 56
2.4 转基因家蚕的筛选与鉴定 58
2.4.1 转基因家蚕的筛选方法 59
2.4.2 转基因家蚕的鉴定内容与技术 67
2.4.3 转基因家蚕中外源基因的稳定遗传 69
2.5 基于转座子转基因技术研究家蚕基因的功能 73
2.5.1 吐丝机理研究 74
2.5.2 变态发育调节研究 75
2.5.3 浓核病抗性基因的鉴定 79
2.5.4 性腺发育调节研究 80
2.5.5 增强子、启动子捕捉 81
2.5.6 注射锌指核酸酶进行靶向突变 85
2.6 基于同源重组的家蚕基因打靶技术探索 89
2.6.1 基于丝素轻链基因为同源臂的基因打靶 89
2.6.2 基于丝素重链基因为同源臂的基因打靶 91
2.6.3 其他打靶载体 92
2.7 家蚕转基因培育新遗传素材 94
2.7.1 转基因提高家蚕对病毒病的抗性 94
2.7.2 转基因改善蚕丝质特性 99
2.7.3 转基因提高家蚕的产丝量 102
2.8 家蚕转基因生物反应器 103
2.8.1 家蚕生物反应器的类型 103
2.8.2 家蚕转基因生物反应器 104
2.9 家蚕稳定转化细胞筛选与建立 111
2.9.1 基于转座子载体介导的稳定转化细胞筛选与建立 112
2.9.2 基于非转座子载体的稳定转化细胞筛选与建立 114
2.9.3 家蚕稳定转化细胞的特点 115
2.9.4 稳定转化细胞表达外源基因 115
2.10 问题与展望 116
参考文献 117
第3章 家蚕营养与人工饲料育 134
3.1 家蚕营养与人工饲料 134
3.1.1 空气 134
3.1.2 蛋白质和氨基酸 135
3.1.3 碳水化合物 135
3.1.4 脂质 136
3.1.5 维生素 137
3.1.6 无机盐 137
3.1.7 水 138
3.2 营养物质的消化和吸收 138
3.2.1 消化酶 138
3.2.2 消化生理 139
3.2.3 各种营养物质的消化和吸收 140
3.2.4 营养物质的利用 141
3.3 家蚕人工饲料育研究历史 146
3.3.1 低成本人工饲料的研发 146
3.3.2 家蚕人工饲料育品种的筛选和培育 147
3.3.3 家蚕人工饲料育的应用 148
3.4 家蚕人工饲料 150
3.4.1 人工饲料要求 150
3.4.2 桑蚕的食性与饲料组成 151
3.4.3 人工饲料的组成 152
3.4.4 人工饲料的种类 153
3.5 家蚕人工饲料实用化 155
3.5.1 家蚕人工饲料育的现状 155
3.5.2 线性规划法设计饲料配方 155
3.5.3 低成本人工饲料的开发 157
3.5.4 人工饲料适应性蚕品种 158
3.6 家蚕人工饲料育应用展望 159
参考文献 159
第4章 家蚕激素与生长发育调控 161
4.1 激素的研究概况 161
4.1.1 激素的发现与命名 161
4.1.2 昆虫激素的研究简史 162
4.1.3 内分泌的靶器官 162
4.1.4 昆虫激素研究的意义 162
4.2 基因与激素 163
4.2.1 保幼激素与基因功能 164
4.2.2 蜕皮激素与基因功能 165
4.2.3 滞育激素与基因功能 171
4.2.4 促前胸腺激素与基因功能 172
4.3 家蚕生长发育的激素调控 173
4.3.1 脑激素 173
4.3.2 咽下神经节激素——滞育激素 174
4.3.3 内分泌腺激素 175
4.3.4 内分泌对昆虫生理的调节 180
4.4 昆虫激素的作用机制 185
4.4.1 控制内分泌的基因 185
4.4.2 环境的影响 186
4.4.3 激素的作用机制 187
4.5 激素的应用 189
4.5.1 内源激素的调控与应用 189
4.5.2 外源激素的应用 190
4.5.3 防治害虫 193
4.5.4 医药上的应用 193
参考文献 193
第5章 家蚕防御功能与养蚕用药物 196
5.1 家蚕病原微生物的侵染机制与环境稳定性 197
5.1.1 病原微生物的感染途径 198
5.1.2 病原微生物的增殖、排出和病害流行 200
5.1.3 病原微生物的环境稳定性 214
5.2 家蚕对病原微生物的防御功能 218
5.2.1 机械性防御功能 218
5.2.2 细胞性防御功能 219
5.2.3 体液性防御功能 220
5.2.4 其他防御功能因子 224
5.3 养蚕用药的临床试验与评价 227
5.3.1 消毒类药物的临床效果评价 228
5.3.2 抗生素类药物的临床试验与评价 235
5.3.3 抗寄生虫药物和激素等其他药物的临床试验与评价 236
参考文献 237
第6章 家蚕病害诊断与检测技术 249
6.1 个体诊断与群体分析的肉眼诊断技术 250
6.1.1 基于病征和病变的肉眼诊断技术 250
6.1.2 基于光学显微镜的诊断 254
6.1.3 基于化学分析与测试的诊断 255
6.2 免疫学诊断技术 256
6.2.1 抗原的纯化 257
6.2.2 多克隆抗体的制备 264
6.2.3 单克隆抗体的制备 268
6.2.4 主要免疫学检测技术简介 284
6.3 分子生物学诊断技术 305
6.3.1 聚合酶链式反应的基本原理 306
6.3.2 主要的PCR种类 310
6.3.3 主要分子生物学检测技术简介 320
参考文献 329
第7章 家蚕杆状病毒表达系统与重组蛋白生产技术 336
7.1 昆虫杆状病毒生物学 336
7.1.1 昆虫杆状病毒一般概述 336
7.1.2 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)生物学和分子生物学 339
7.2 家蚕杆状病毒表达系统与重组蛋白生产 346
7.2.1 家蚕杆状病毒表达系统一般原理 346
7.2.2 构建重组病毒的一般技术 348
7.2.3 重组杆状病毒构建与筛选技术进展 349
7.2.4 重组病毒构建等操作指南 355
7.2.5 家蚕中表达外源目的产物的纯化 357
7.3 家蚕杆状病毒表达系统的改进 359
7.3.1 家蚕Bac-to-Bac快速表达系统的构建 359
7.3.2 家蚕Polh+Bac-to-Bac快速表达系统的构建 365
7.3.3 提高杆状病毒表达效率的技术 371
7.4 杆状病毒在其他领域的应用 374
7.4.1 杆状病毒应用于表面展示系统 374
7.4.2 杆状病毒作为哺乳动物细胞基因转运载体 375
7.4.3 杆状病毒多角体晶体用于固定外源蛋白质 376
7.4.4 杆状病毒应用于生物纳米材料 376
7.5 家蚕杆状病毒BmNPV Bac-to-Bac表达载体系统操作指南 377
7.5.1 方法 378
7.5.2 常见问题、原因及解决方法 383
7.5.3 其他参考信息 385
7.5.4 供体质粒MCS图谱 394
参考文献 395
第8章 蚕桑资源利用技术 405
8.1 蚕沙叶绿素及其衍生物的分离技术 405
8.1.1 叶绿素的化学结构和性质 405
8.1.2 蚕沙叶绿素及其衍生物的提取原理和测定方法 406
8.1.3 影响叶绿素降解的主要因素 407
8.1.4 叶绿素衍生物的制备和标准 408
8.1.5 叶绿素衍生物的用途 410
8.2 蚕蛹氨基酸及其纯化技术 410
8.2.1 氨基酸的化学结构和性质 410
8.2.2 氨基酸的制备和测定方法 413
8.2.3 蚕蛹氨基酸生产技术 416
8.2.4 氨基酸的生理活性和营养价值 417
8.2.5 氨基酸产品和用途 420
8.3 蚕类抗菌肽的制备技术 421
8.3.1 抗菌肽的分类和分子结构 421
8.3.2 抗菌肽的活性和作用机理 422
8.3.3 抗菌肽的分离纯化技术 423
8.3.4 蚕类抗菌肽的特性 424
8.3.5 蚕类抗菌肽的用途 425
8.4 蚕丝蛋白及其产品制备技术 427
8.4.1 蚕丝蛋白的组成及其化学成分 427
8.4.2 丝胶丝素的分离技术 428
8.4.3 丝素的生物材料特性和生物医药利用 429
8.4.4 蚕丝化妆品原料 437
8.4.5 蚕丝的食用 437
8.5 桑的利用技术 439
8.5.1 桑叶的化学成分和生理活性 440
8.5.2 桑叶的利用 444
8.5.3 桑葚的化学成分和生理活性 445
8.5.4 桑葚的利用 450
8.5.5 桑枝的成分和性质 452
8.5.6 桑枝的利用 455
参考文献 458