基因工程PDF电子书下载

查看更多关于的内容

1基因工程概述 1

1.1 基因工程的概念与基本流程 1

1.1.1 基因工程的概念 1

1.1.2 基因工程的基本流程 2

1.2 基因工程的发展简史 3

1.2.1 基因工程诞生的背景 3

1.2.2 基因工程的诞生 4

1.2.3 基因工程的发展 6

1.3 基因工程的研究意义和应用 7

1.3.1 基因工程在功能基因组学研究中的应用 7

1.3.2 基因工程在工业领域的应用 8

1.3.3 基因工程在农业领域的应用 9

1.3.4 基因工程在医药领域的应用 11

本章小结 13

复习题 13

2基因工程工具酶 14

2.1 限制性核酸内切酶 14

2.1.1 限制性核酸内切酶的发现和种类 14

2.1.2 限制性核酸内切酶的命名 16

2.1.3 限制性核酸内切酶的特征 16

2.1.4 限制性核酸内切酶的同尾酶 18

2.1.5 影响限制性核酸内切酶酶切反应的因素 20

2.1.6 限制性核酸内切酶酶切位点的引入与消失 22

2.2 DNA连接酶 23

2.2.1 DNA连接酶的作用 23

2.2.2 不同末端的连接策略 25

2.2.3 影响DNA连接反应的因素 27

2.3 DNA聚合酶类 29

2.3.1 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 29

2.3.2 Klenow大片段酶 30

2.3.3 耐热的DNA聚合酶Taq 30

2.3.4 T4噬菌体DNA聚合酶 31

2.3.5 逆转录酶 32

2.4 碱性磷酸酶 33

2.4.1 碱性磷酸酶防止载体自连 33

2.4.2 获得5′末端磷酸基团标记的探针 36

2.5 末端脱氧核苷酸转移酶 36

2.6 其他工具酶 37

2.6.1 IIs型限制性核酸酶 38

2.6.2 Cas核酸内切酶 39

2.6.3 Dicer酶 39

2.6.4 重组酶 40

本章小结 43

复习题 43

3基因工程载体 44

3.1 克隆载体 44

3.1.1 质粒载体 45

3.1.2 噬菌体载体 53

3.1.3 黏粒载体 57

3.1.4 人工微小染色体 58

3.2 表达载体 60

3.2.1 原核表达载体 60

3.2.2 真核表达载体 72

本章小结 76

复习题 76

4目的基因的获取与制备 77

4.1 从基因文库获取目的基因 78

4.1.1 基因组文库的构建与筛选 78

4.1.2 cDNA基因文库的构建与筛选 83

4.2 电子克隆法获取目的基因 92

4.2.1 利用EST数据库进行电子克隆 93

4.2.2 利用基因组数据库进行电子克隆 93

4.2.3 全长cDNA的判断 94

4.2.4 电子克隆基因的生物信息学分析 95

4.3 PCR获取与扩增目的基因 95

4.3.1 常规PCR 95

4.3.2 反向PCR 102

4.3.3 反转录PCR 104

4.3.4 实时荧光定量PCR 105

4.3.5 多重PCR 110

4.3.6 巢式PCR 113

4.3.7 不对称PCR 113

4.3.8 RACE-PCR 114

4.3.9 原位PCR 114

4.4 通过蛋白质工程改建目的基因 116

4.4.1 蛋白质工程的概念 116

4.4.2 蛋白质工程的定点突变技术 117

4.4.3 蛋白质工程的定向进化技术 121

本章小结 123

复习题 124

5目的基因导入受体细胞的方法 125

5.1 把目的基因导入大肠杆菌 126

5.1.1 自然条件下的转化过程 126

5.1.2 感受态受体细胞的选择 128

5.1.3 外源目的基因转化进入大肠杆菌细胞的方法 129

5.1.4 外源基因通过噬菌体转导进入受体细胞 131

5.2 把目的基因导入酵母细胞 133

5.2.1 聚乙二醇介导的酵母转化 133

5.2.2 金属阳离子介导的酵母转化 134

5.3 把目的基因导入植物细胞 134

5.3.1 DNA直接转移法 135

5.3.2 农杆菌Ti质粒载体介导法 137

5.4 把目的基因导入动物细胞 141

5.4.1 外源基因导入离体培养的动物细胞 142

5.4.2 外源基因导入在体动物细胞 144

本章小结 147

复习题 147

6阳性转化子的鉴定 148

6.1 遗传表型检测法 148

6.1.1 利用载体提供的表型特征筛选和鉴定重组DNA分子 149

6.1.2 利用外源目的基因本身的序列提供的表型特征筛选 153

6.2 酶切电泳检测 155

6.2.1 凝胶电泳检测筛选 155

6.2.2 限制性核酸内切酶酶切分析筛选 156

6.3 核酸分子杂交 158

6.3.1 Southern印迹杂交 159

6.3.2 Northern印迹杂交 164

6.3.3 蛋白质印迹分析 167

6.4 PCR扩增鉴定筛选 168

6.5 DNA序列测定 169

6.5.1 Sanger双脱氧末端终止法 169

6.5.2 化学降解法 171

6.5.3 自动测序法 172

6.5.4 二代测序技术 173

6.5.5 三代测序技术 176

6.5.6 单细胞测序技术 179

6.5.7 高通量测序在组学研究中的应用 180

本章小结 184

复习题 184

7基因工程在基因功能研究中的应用 185

7.1 基因的表达谱研究技术 185

7.1.1 胚胎原位杂交技术 186

7.1.2 胚胎抗体染色技术 190

7.1.3 基因芯片技术 194

7.2 基因的突变研究技术 199

7.2.1 化学诱变 199

7.2.2 转座子全基因组诱变 200

7.3 基因敲除技术 204

7.3.1 完全基因敲除技术 204

7.3.2 条件基因敲除技术 209

7.4 基因编辑技术 214

7.4.1 锌指核酶基因敲除技术 215

7.4.2 TALEN基因编辑技术 218

7.4.3 CRISPR基因编辑技术 221

7.5 基因敲减技术 241

7.5.1 RNA干扰技术 241

7.5.2 Morpholino干扰技术 244

7.6 基因过表达与异位表达技术 246

7.6.1 GAL4/UAS系统的构建 247

7.6.2 GAL4/UAS定时开启系统 248

7.7 基因的相互作用研究技术 249

7.7.1 凝胶迁移率阻滞技术 250

7.7.2 染色质免疫沉淀技术 250

7.7.3 酵母双杂交技术 253

7.7.4 免疫共沉淀技术 256

本章小结 257

复习题 258

8转基因植物 259

8.1 转基因植物研究和生产现状 260

8.1.1 转基因植物的研究概况 260

8.1.2 抗除草剂转基因作物 261

8.1.3 抗虫转基因作物 263

8.1.4 提高作物产量和品质的转基因作物 266

8.1.5 其他转基因作物 268

8.1.6 植物生物反应器 273

8.2 转基因植物的筛选与检测 275

8.2.1 报告基因 275

8.2.2 分子生物学检测方法 277

8.3 转基因植物的安全性 278

8.3.1 转基因安全性的由来 279

8.3.2 转基因安全性的争论 279

8.3.3 转基因作物安全性评价程序 284

8.3.4 转基因作物安全性的监管 285

本章小结 287

复习题 287

9转基因动物 288

9.1 动物转基因技术 289

9.1.1 显微注射法 289

9.1.2 逆转录病毒感染法 294

9.1.3 胚胎干细胞介导法 297

9.1.4 体细胞核移植法 299

9.2 转基因动物的筛选与检测 305

9.2.1 报告基因 305

9.2.2 分子生物学检测方法 306

9.2.3 转基因动物整体表型的观察 309

9.3 转基因动物的现状与应用 309

9.3.1 转基因动物的现状 309

9.3.2 转基因动物在基因功能研究中的应用 310

9.3.3 转基因技术在动物育种中的应用 311

9.3.4 转基因动物在医学研究中的应用 313

9.3.5 动物生物反应器 314

本章小结 318

复习题 318

10基因治疗 319

10.1 基因治疗的概念与策略 319

10.1.1 基因治疗的途径与策略 320

10.1.2 基因治疗的基本程序 321

10.1.3 基因治疗的发展、现状与问题 323

10.2 基因治疗的载体 328

10.2.1 逆转录病毒载体 328

10.2.2 腺病毒载体 329

10.2.3 腺相关病毒载体 332

10.2.4 单纯疱疹病毒载体 333

10.2.5 非病毒载体 335

10.3 重要疾病的基因治疗 336

10.3.1 遗传病的基因治疗 336

10.3.2 肿瘤的基因治疗 342

10.3.3 艾滋病的基因治疗 358

本章小结 367

复习题 367

参考书目与文献 368

查看更多关于的内容