中国南海新型芋螺毒素的克隆、纯化、结构和功能研究PDF电子书下载

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第1章 引言 1

1.1 芋螺的生物学 1

1.2 芋螺毒素的分类和命名规则 2

1.3 芋螺毒素的分子生物学特征 4

1.4 芋螺毒素的翻译后修饰 5

1.5 芋螺毒素的生理活性 8

1.5.1 乙酰胆碱受体的选择性拮抗剂：α-、αA-和ψ-芋螺毒素 8

1.5.2 钠离子通道拮抗剂：μ-、μO-和δ-芋螺毒素 11

1.5.3 钙离子通道选择性拮抗剂：ω-芋螺毒素 15

1.5.4 钾离子通道的阻断剂或激动剂：κ-、κA-、κM-和κI-芋螺毒素 17

1.5.5 NMDA受体拮抗剂：conantokin 19

1.5.6 Contryphan 21

1.5.7 其他 22

1.6 广阔的应用前景和潜在的开发价值 23

1.7 展望 24

第2章 中国南海新型芋螺毒素的cDNA克隆及序列分析 25

2.1 概述 25

2.2 材料 27

2.2.1 组织样品 27

2.2.2 试剂 27

2.2.3 菌株 28

2.2.4 培养基 28

2.2.5 缓冲液 28

2.2.6 提取RNA的实验用品 29

2.2.7 常用仪器设备 29

2.3 方法 29

2.3.1 注意事项 29

2.3.2 芋螺毒管的处理 30

2.3.3 总RNA的提取 30

2.3.4 芋螺毒管cDNA的合成 30

2.3.5 各基因超家族芋螺毒素序列的同源检索及分析 32

2.4 结果和讨论 33

2.4.1 芋螺毒管总RNA的提取 33

2.4.2 A-超家族芋螺毒素cDNA序列的克隆及序列分析 33

2.4.3 I2-芋螺毒素cDNA序列的克隆及序列分析 43

2.4.4 M-超家族芋螺毒素cDNA序列的克隆及序列分析 48

2.4.5 O-超家族芋螺毒素cDNA序列的克隆及序列分析 59

2.4.6 T-1家族芋螺毒素cDNA序列的克隆及序列分析 63

第3章 中国南海处女芋螺中新型芋螺毒素的分离纯化、cDNA克隆和溶液结构研究 73

3.1 概述 73

3.2 材料和方法 74

3.2.1 材料 74

3.2.2 粗毒的提取 74

3.2.3 凝胶色谱分级纯化 74

3.2.4 反相柱分离纯化 75

3.2.5 分子量测定 75

3.2.6 蛋白还原和烷基化 75

3.2.7 蛋白序列测定 76

3.2.8 总RNA抽提和第一链cDNA的合成 76

3.2.9 3′RACE和5′RACE 77

3.3 结果和讨论 78

3.3.1 α-芋螺毒素ViIA两种天然二硫键异构体的发现 78

3.3.2 O-超家族富含甘氨酸芋螺毒素vi6a的发现和溶液结构测定 84

3.3.3 全新基因超家族V-芋螺毒素vi15a的发现和cDNA克隆 95

3.3.4 处女芋螺毒液其他成分的分离纯化和性质鉴定 110

3.3.5 信号芋螺毒液成分的分离纯化和分子量鉴定 117

3.3.6 花玛瑙芋螺毒液成分的分离纯化和分子量鉴定 119

第4章 中国南海新型芋螺毒素的溶液结构和功能研究 122

4.1 概述 122

4.2 材料和方法 124

4.2.1 线形肽的固相化学全合成和体外氧化折叠 124

4.2.2 活体动物毒性实验 125

4.2.3 电生理 126

4.3 结果和讨论 127

4.3.1 α4/4-芋螺毒素Qc1.2r 功能研究 127

4.3.2 α4/6-芋螺毒素Vi I A-a和Vi I A-b的功能研究 135

4.3.3 α4/7-芋螺毒素Lp1.1和Lp1.4的功能研究 136

4.3.4 α4/7-芋螺毒素Mr1.1的功能研究 145

4.3.5 framework 14芋螺毒素pu14a的固相化学合成、体外氧化折叠、溶液结构和功能研究 153

参考文献 163

后记 188

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