绪论 1
一、发酵工程实验的特点 1
二、发酵工程实验室的特点与要求 3
三、发酵工程实验设计(方案)的基本步骤 5
四、发酵工程实验常用的设备 21
第一部分 基本技能实验 29
第一章 菌种改造 29
实验一 菌种的分离纯化 30
实验二 紫外线诱变 32
实验三 微波诱变 34
实验四 亚硝基胍诱变 36
实验五 噬菌体的分离和测定 38
实验六 抗噬菌体菌种选育 40
实验七 氨基酸抗反馈调节突变株的选育 43
实验八 大肠杆菌营养缺陷型的筛选 45
实验九 原生质体制备及再生 48
实验十 原生质体融合 50
实验十一 基因组改组技术筛选蛋白酶高产菌株 52
实验十二 基因组DNA的提取 54
实验十三 煮沸法快速提取质粒DNA 57
实验十四 碱裂解法抽提质粒DNA与鉴定 59
实验十五 DNA的限制性内切酶消化 62
实验十六 琼脂糖电泳检测DNA 63
实验十七 PCR技术扩增枯草杆菌deoD基因 65
实验十八 重组T质粒的构建 67
实验十九 感受态的制备和转化 68
实验二十 重组质粒的鉴定——菌落PCR 71
第二章 培养基配制与灭菌 73
实验二十一 培养基的配制 73
实验二十二 高压灭菌锅的使用 75
第三章 摇瓶发酵 78
实验二十三 接种工具的认识与灭菌 78
实验二十四 接种和移种 80
实验二十五 枯草芽孢杆菌生产腺苷 82
实验二十六 重组大肠杆菌羧肽酶的表达 85
实验二十七 洛伐他汀发酵 87
实验二十八 林可霉素发酵 89
实验二十九 四环素类抗生素定向发酵 91
实验三十 β-半乳糖苷酶生成的调节 94
实验三十一 芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶 96
第四章 发酵生化参数的测定 98
实验三十二 比浊法测定发酵液中大肠杆菌浓度 99
实验三十三 测定菌体干重 100
实验三十四 紫外分光光度法定量测定细胞总核酸 101
实验三十五 红霉素效价的化学法测定(一) 102
实验三十六 红霉素效价的化学法测定(二) 103
实验三十七 红霉素生物效价的测定 104
实验三十八 二剂量法测定林可霉素生物效价 107
实验三十九 利福霉素化学效价的测定 109
实验四十 柠檬酸含量测定(一) 111
实验四十一 柠檬酸含量测定(二) 112
实验四十二 衣康酸含量测定 114
实验四十三 丙酮酸含量测定 115
实验四十四 SBA-40C型生物传感分析仪测定谷氨酸和谷氨酰胺 117
实验四十五 华勃氏呼吸仪测定谷氨酸的含量 119
实验四十六 双缩脲法测定蛋白质含量 122
实验四十七 Folin-酚法测定蛋白质浓度 123
实验四十八 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 125
实验四十九 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白质表达和测定蛋白质相对分子质量 126
实验五十 发酵液中糖含量的测定 129
实验五十一 DNS法测定还原糖浓度 131
实验五十二 酶试剂盒法测定葡萄糖含量 133
实验五十三 SBA-40型谷氨酸(乳酸)-葡萄糖双功能分析仪测定葡萄糖含量 134
实验五十四 发酵液氮含量的测定 136
实验五十五 靛酚蓝法测定铵离子 138
实验五十六 钼酸铵法测定无机磷 139
实验五十七 还原法测定无机磷 140
实验五十八 钼钒法测定无机磷 142
实验五十九 无细胞抽提液的制备 143
实验六十 葡糖激酶活力测定 144
实验六十一 磷酸果糖激酶活力测定 146
实验六十二 异柠檬酸脱氢酶活力测定 147
实验六十三 6-磷酸葡糖脱氢酶活力测定 149
实验六十四 丙酮酸激酶活力测定 150
实验六十五 柠檬酸合成酶活力测定 152
实验六十六 碱性磷酸酶活力测定 153
实验六十七 脂肪酶活力测定 155
实验六十八 碱性蛋白酶活力测定 156
实验六十九 酰基激酶活力测定 158
实验七十 酰基CoA合成酶活力测定 160
第五章 色谱分析在发酵工程中的应用 162
实验七十一 反相HPLC双检测器法同时测定发酵液中的有机酸与葡萄糖 163
实验七十二 AQC柱前衍生高效液相色谱法测定发酵液中21种氨基酸 165
实验七十三 反相高效液相色谱法测定发酵液中的生物素含量 167
实验七十四 利用乙腈作为内标气相色谱法快速测定发酵液中的乳酸 169
第六章 过程工程参数测定 171
实验七十五 亚硫酸钠氧化法测定氧传递系数KL a 171
实验七十六 用溶氧电极法的动态法测定氧传递系数KLa 173
实验七十七 混合时间测定 175
第二部分 综合实验 181
第七章 微生物培养 181
实验一 ε-聚赖氨酸生产菌株的选育与发酵工艺的研究 181
实验二 D-核糖发酵 184
实验三 重组大肠杆菌发酵人铜锌超氧化物歧化酶的高密度、高表达 188
实验四 黑曲霉产纤维素酶液体发酵 190
实验五 拟干酪乳杆菌发酵生产乳酸 194
实验六 嘌呤核苷磷酸化酶在大肠杆菌中表达和酶学性质测定 198
实验七 酶催化蔗糖转化反应 202
实验八 酵母培养中的基质代谢、呼吸和生长的参数检测与参数相关分析 207
实验九 酵母厌氧乙醇发酵 211
实验十 重组毕赤酵母高密度发酵表达植酸酶及其分离纯化 215
实验十一 大肠杆菌高密度发酵生产脱氨酶 223
实验十二 酵母细胞内代谢物的检测分析 229
第八章 动物细胞培养 234
实验十三 造血细胞分离、集落培养及表型分析 234
实验十四 动物细胞的培养和计数 237
实验十五 细胞的冷冻和复苏 239
参考文献 241