绪论 1
一、生物化学实验室规则 1
二、生物化学实验的学习方法 2
第一单元 基础性实验 7
实验一 还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法 9
实验二 总糖的测定——蒽酮比色定糖法 12
实验三 血糖的测定——邻甲苯胺法 15
实验四 粗脂肪的提取与含量测定——索氏抽提法 18
实验五 血清总胆固醇的测定——邻苯二甲醛法 22
实验六 脂肪碘值的测定——氯化碘加成法 25
实验七 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 29
实验八 谷物种子中赖氨酸含量的测定——茚三酮比色法 32
实验九 胰岛素N末端的测定——聚酰胺薄膜层析法 36
实验十 蛋白质含量的测定 40
Ⅰ.微量凯氏定氮法 40
Ⅱ.Folin-酚试剂法 44
Ⅲ.考马斯亮蓝G-250染色法 47
Ⅳ.紫外吸收法 49
实验十一 蛋白质的脱盐——凝胶层析法 52
实验十二 血清蛋白质的分离——醋酸纤维素薄膜电泳法 56
实验十三 蛋白质亚基分子量的测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 62
实验十四 酶的化学特性 67
实验十五 米氏常数(K m)和最大反应速率(V max)的测定 72
实验十六 酶的竞争性抑制作用——琥珀酸脱氢酶 77
实验十七 植物过氧化物酶同工酶的分离、鉴定——等电聚焦电泳法 80
实验十八 维生素A、维生素B1和维生素B2的鉴定 84
实验十九 维生素A含量的测定 88
实验二十 维生素C含量的测定——2,6-二氯酚靛酚滴定法 91
实验二十一 核酸含量的测定 95
Ⅰ.紫外吸收法 95
Ⅱ.定磷法 97
实验二十二 酵母RNA的提取、鉴定及含量测定 101
实验二十三 动物组织中DNA的提取 105
实验二十四 核苷酸的分离鉴定——DEAE-纤维素薄板层析法 107
实验二十五 DNA的琼脂糖凝胶电泳 110
实验二十六 糖酵解中间产物的鉴定——抑制剂法 114
实验二十七 酶促转氨反应的鉴定——纸层析法 117
实验二十八 末端氧化酶——多酚氧化酶的显现与活性测定 120
实验二十九 脂肪酸的β-氧化——硫代硫酸钠滴定法 123
第二单元 综合性实验 127
实验三十 蛋白质分子量的测定——凝胶层析法 129
实验三十一 牛奶中酪蛋白的提取与含量测定 134
实验三十二 豆磷脂的制备与鉴定 140
实验三十三 酵母蔗糖酶的分离提取及效果分析 147
实验三十四 综合实践:盐胁迫对小麦种子萌发及幼苗生理生化特性的影响 152
第三单元 设计性实验 157
实验三十五 毛发的水解、鉴定和胱氨酸制备 159
实验三十六 外界因素对酶活性的影响 161
实验三十七 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 164
实验三十八 多糖的提取与分析鉴定 166
附录 169
附录一 实验室安全与防护知识 171
附录二 玻璃仪器的清洗与干燥 172
附录三 试剂的配制与保存 175
附录四 常用缓冲溶液的配制 179
附录五 常用酸碱指示剂及有机溶剂的性质 184
附录六 常用仪器设备的使用 190
附录七 离心机转速(r·min-1)与相对离心力(RCF)的换算 212
附录八 常见蛋白质的相对分子质量和等电点参考值 214
附录九 硫酸铵饱和度常用表 216
参考文献 218