生物化学实验基本知识 1
一、实验课的目的要求 1
二、生化实验室规则 1
生物化学实验某些基本操作 2
一、玻璃仪器的使用及清洁 2
二、一般技术操作 4
三、实验样品的制备 5
常用的生物化学实验技术 7
一、电泳法 7
二、层析法 11
三、比色和分光分析法 18
四、离心法 24
实验内容 27
实验一 蛋白质的沉淀与凝固 27
实验二 蛋白质等电点的测定 29
实验三 紫外吸收法测定蛋白质含量 30
实验四 双缩脲法测定蛋白质含量 31
实验五 改良酚试剂法测定蛋白质含量 31
实验六 微量凯氏定氮法 33
实验七 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定 36
实验八 血清蛋白醋酸薄膜电泳 40
实验九 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 41
实验十 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 43
实验十一 离子交换层析分离混合氨基酸 47
实验十二 凝胶过滤层析脱盐和分离蛋白质 48
实验十三 乳酸脱氢酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分离法 49
实验十四 温度、pH、激动剂和抑制剂对酶活性的影响 51
实验十五 底物浓度对酶促反应速度的影响 53
实验十六 动物组织中核酸的提取和含量测定 58
实验十七 酵母RNA的提取和鉴定 63
实验十八 血糖的测定 64
实验十九 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 68
实验二十 血清胆固醇测定 69
实验二十一 甘油三酯的测定 70
实验二十二 血清脂蛋白琼脂糖电泳 72
实验二十三 脂类的薄层层析 74
实验二十四 生物氧化实验 75
实验二十五 线粒体的制备与P/O比值测定 78
实验二十六 谷氨酸的氧化脱氨基作用 79
实验二十七 血清尿素氮的测定 82
实验二十八 血清丙氨酸氨基转移酶测定 83
实验二十九 纸层析法鉴定转氨基作用 85
实验三十 钾钠测定 87
实验三十一 血清无机磷的测定 90
实验三十二 血清钙的测定 91
实验三十三 血清氯化物的测定 93
实验三十四 血浆CO2结合力测定(滴定法) 94
实验三十五 食物中维生素C的提取和定量 95
实验三十六 胡萝卜素的柱层析分离法 97
实验三十七 维生素B1的测定 97
实验三十八 维生素B2的测定 100
实验三十九 淀粉酶活性测定(碘—淀粉比色法) 102
附录 104
一、常用酸碱的比重和浓度 104
二、常用酸碱指示剂 104
三、常用缓冲液的配制 105
四、常用试剂配制公式 107
五、常用元素原子量原子价表 108