第1章 绪论 1
1.1降解石油烃产甲烷的研究背景 2
1.2降解石油烃产甲烷的目的和意义 3
1.3降解石油烃产甲烷的国内外研究进展 5
1.3.1降解石油烃产甲烷的功能菌群 8
1.3.2影响微生物厌氧降解产甲烷的条件 18
1.3.3石油降解的副产物 19
1.3.4石油烃厌氧代谢机理 19
1.3.5降解石油烃产甲烷的微生物分析方法 21
1.4主要研究内容及技术路线 22
1.4.1主要研究内容 22
1.4.2主要技术路线 23
参考文献 24
第2章 降解石油烃产甲烷菌群的初筛 38
2.1主要仪器和试剂 43
2.1.1主要仪器 43
2.1.2主要试剂 43
2.2实验设计和方法 45
2.2.1实验设计 45
2.2.2实验方法 48
2.3实验结果与讨论 54
2.3.1采出液理化性质分析 54
2.3.2 YH5和TH2菌群的初筛 55
2.3.3产甲烷前后石油烃的变化 60
2.3.4 YH5和TH2菌群结构的分析&() 64
2.4本章小结 70
参考文献 71
第3章 高效产甲烷菌群的建立 79
3.1主要仪器和试剂 85
3.1.1主要仪器 85
3.1.2主要试剂 86
3.2实验设计和方法 87
3.2.1实验设计 87
3.2.2实验方法 89
3.3实验结果与讨论 90
3.3.1温度和压力的模拟系统气密性和安全性分析 90
3.3.2 YH5和TH2的配比分析及HYH5的建立 92
3.3.3产甲烷菌群HYH5降解石油的分析 95
3.3.4温度和压力对HYH5降解石油烃产甲烷的影响 100
3.4本章小结 104
参考文献 106
第4章 混合菌中单菌鉴定及混合菌培养条件的优化 111
4.1主要仪器和试剂 112
4.1.1主要仪器 112
4.1.2主要试剂 112
4.2实验设计和方法 112
4.2.1实验设计 112
4.2.2实验方法 114
4.3实验结果与讨论 117
4.3.1 HYH5和YHH6混合菌群中单菌的分离鉴定 117
4.3.2接种量对HYH5菌群的影响 126
4.3.3初始pH值对HYH5菌群的影响 126
4.3.4初始盐度对HYH5菌群的影响 127
4.3.5石油浓度对HYH5菌群的影响 127
4.3.6采油剂聚丙烯酰胺对HYH5菌群的影响 128
4.4本章小结 129
参考文献 131
第5章 生长激活剂对菌群产甲烷的影响 133
5.1主要仪器和试剂 134
5.1.1主要仪器 134
5.1.2主要试剂 134
5.2实验设计和方法 135
5.2.1不同表面活性剂对HYH5混合菌群产甲烷的影响 135
5.2.2不同碳源对HYH5菌群产甲烷的影响 135
5.2.3钼离子和锌离子对HYH5菌群产甲烷的影响 136
5.2.4硫酸根和硝酸根电子受体对HYH5菌群产甲烷的影响 136
5.2.5 YHH6副产物对HYH5菌群产甲烷影响 137
5.3实验结果与讨论 138
5.3.1不同表面活性剂对HYH5混合菌群产甲烷的影响 138
5.3.2不同碳源对HYH5菌群产甲烷的影响 139
5.3.3钼离子和锌离子对HYH5菌群产甲烷的影响 140
5.3.4硫酸根和硝酸根电子受体对HYH5菌群产甲烷的影响 140
5.3.5红外光谱和高效液相色谱分析YHH6副产物 142
5.3.6 YHH6副产物对HYH5菌群产甲烷的影响 143
5.4 HYH5厌氧产甲烷菌群的应用 144
5.5本章小结 145
参考文献 146
第6章 降解石油烃产甲烷的机理初探 149
6.1主要仪器和试剂 151
6.1.1主要仪器 151
6.1.2主要试剂 151
6.2实验设计和方法 151
6.2.1实验设计 151
6.2.2实验方法 152
6.3实验结果与讨论 153
6.3.1 HYH5菌群降解同位素标记的甲苯 153
6.3.2 HYH5菌群降解链烃的分析 157
6.4本章小结 158
参考文献 158
第7章 结论及展望 160
7.1结论 161
7.2展望 162
附录 164
附录1:紫外分光光度法测定采出水中总氮 165
附录2: DNA提取仪器设备 168
附录3: DNA提取步骤 168
附录4: DGGE标准操作方法 169
附录5:降解菌的生理生化特性实验 170
附录6:细菌基因组DNA提取试剂盒使用方法 172
附录7:基因组DNA及PCR产物琼脂糖电泳 174
附录8:原油四组分分离方法 175